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    黃曲黴毒素(B1,B2,G1,G2)的高效液相色譜HPLC檢測方案
    [ 2016-06-04 ]

     

    【黃曲黴毒素】
    黃曲黴毒素是主要由黃曲黴 (aspergillus flavus)寄生曲黴 (a.parasiticus)産生的次生代謝産物,在濕熱地區食品和飼料中出現黃曲黴毒素的機率高。B1 、B2和G1、G2,就是經(jīng)常經(jīng)常出現在農産品中的黃曲黴毒素的代表,毒性強的排行“B1”,B表示藍色,因爲它在紫外光的照射下會發(fā)出藍色熒光。除了親兄弟B2之外,它還(hái)有堂兄弟G1和G2,因爲在紫外光下發(fā)射黃綠色熒光而得名。
    黃曲黴毒素在農産品中幾乎無法避免,不想餓死的人類也隻好(hǎo)無奈地吃下一些。世界各國(guó),都(dōu)隻能(néng)設定一個“限量标準”。不超過(guò)那個标準,危害就小到可以忽略了。它們存在于土壤、動植物、各種(zhǒng)堅果中,特别是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麥等糧油産品,當人攝入量大時,可發(fā)生急性中毒,出現急性肝炎、出血性壞死、肝細胞脂肪變性和膽管增生。當微量持續攝入,可造成(chéng)慢性中毒,生長(cháng)障礙,引起(qǐ)纖維性病變,緻使纖維組織增生。AFT的緻癌力也居首位,是目前已知強緻癌物之一。
    由于黃曲黴毒素在水溶液中會發(fā)生熒光淬滅,反相色譜中B1和G1兩(liǎng)種(zhǒng)異構體熒光強度很弱,需要進(jìn)行衍生化。衍生化的方法一般有柱前和柱後(hòu)兩(liǎng)類,我國(guó)藥典在測定黃曲黴毒素時采用碘柱後(hòu)衍生法。

    【樣(yàng)品處理過(guò)程】
    中藥:取供試品粉末15g(過(guò)二号篩),精密稱定,加入氯化鈉3g,置于均質瓶中,精密加入70%甲醇溶液75ml,高速攪拌2min(攪拌速度大于11000r/min),離心5min(離心速度大于2500r/min),精密量取上清液15ml,置50ml量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45um)濾過(guò),量取續濾液20ml,待淨化;
    大米:取樣(yàng)品25g,加入5g氯化鈉與125ml提取液(70%甲醇-水溶液)混勻,劇烈振蕩20min,用快速定性濾紙過(guò)濾,收集濾液;取10ml濾液加入20ml蒸餾水稀釋,過(guò)濾,收集濾液作爲上樣(yàng)液,取15ml該溶液待淨化;
    植物油:取樣(yàng)品25g,加入125ml提取液(80%乙腈-水溶液)混勻,劇烈振蕩20min,用快速定性濾紙過(guò)濾,收集濾液;取10ml濾液加入40ml蒸餾水稀釋,過(guò)濾,收集濾液作爲上樣(yàng)液,取25ml該溶液待淨化;
    淨化過(guò)程需用到黃曲黴免疫親和柱,淨化過(guò)程略。

    【色譜條件】
    色譜柱:C18, 4.6 mm*250 mm,粒度5 µm
    流動相:甲醇-乙腈-水=40:18:42
    流動相B:將(jiāng)2.2g一水庚烷磺酸鈉與6.8g磷酸二氫鉀溶于500ml水中,與500ml甲醇混合,PH=3.5;兩(liǎng)相混合梯度脫洗;
    波長(cháng):λex=360nm     λem=450nm
    流速:0.8 mL/min
    衍生溶液爲0.05%的碘溶液,衍生泵:0.3ml/min, 衍生溫度:70℃

     

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